coolreferat.com.ua сторінка 1сторінка 2сторінка 3

МЗРФ

ДВГМУ

Кафедра загальної, фізичної та колоїдної хімії

Реферат

Тонкошарова хроматографія. Застосування у фармації
Виконав: студент групи 201-Ф

Данилов Д. І.

Перевірив: Нємов В. А.

р Хабаровськ, 2 005

ПЛАН:

Введення

Фізико-хімічні основи ТШХ

Розподільна хроматографія на папері

Основи тонкошарової хроматографії

  • сорбенти

  • розчинники

  • підготовка пластин

  • техніка нанесення досліджуваних розчинів

Хроматографування

  • Висхідна тонкошарова хроматографія

  • Низхідна тонкошарова хроматографія

  • Горизонтальна тонкошарова хроматографія

  • Радіальна тонкошарова хроматографія.

Сушка пластин.

Ідентифікація розділених речовин



Застосування методу ТШХ у фармації


  • Кількісне визначення тритерпенових сапонінів методом ВЕТСХ з використанням скануючої денситометрії

  • Вивчення ліпідного та флавоноїдного складу зразків деяких видів роду Чину (Lathyrus.)

Висновок

Література

Введення


Тонкошарова хроматографія (ТШХ, TLC) - один з найбільш використовуваних методів хроматографічного аналізу, але найменш несвідомо популяризуються.
Незважаючи на існуючі до недавнього часу суттєві недоліки, вона широко використовується для якісного аналізу сумішей, в основному, за рахунок дешевизни і швидкості отримання результатів. Тонкошарова хроматографія (ТШХ) спочатку була розроблена для розділення ліпідів. Хоча хроматографія на папері швидше, ніж хроматографія на колонці, до недоліків її слід віднести те, що папір може бути виготовлена ​​тільки з матеріалів на основі целюлози, що не дозволяє застосовувати її для розділення неполярних речовин. Тонкошарова хроматографія зберігає всі переваги хроматографії на папері, але при цьому дозволяє використовувати будь-який матеріал, який можна тонко подрібнити і отримати потім однорідний шар. Це можуть бути неорганічні речовини, наприклад силікагель, окис алюмінію, діатомова земля і силікат магнію, а також органічні речовини, зокрема целюлоза, поліаміди і порошок поліетилену.

Фізико-хімічні основи тонкошарової хроматографії.


Основою тонкошарової хроматографії є ​​адсорбційний метод, хоча також зустрічається метод розподільної хроматографії.
Адсорбційний метод заснований на розходженні ступеня сорбції-десорбції поділюваних компонентів на нерухомій фазі. Адсорбція здійснюється за рахунок ван-дер-вальсовскіх сил, що є основою фізичної адсорбції, полімолекулярної (освіта декількох шарів адсорбата на поверхні адсорбенту) і хемосорбцией (хімічної взаємодії адсорбенту і адсорбату).
Для ефективних процесів сорбції-десорбції необхідна велика площа, що висуває певні вимоги до адсорбентів. При великій поверхні поділу фаз відбувається швидке встановлення рівноваги між фазами компонентів суміші та ефективне розподіл.
Ще одним видом використовуваному в методі тонкошарової хроматографії є ​​розподільна рідинна хроматографія.
У розподільній хроматографії обидві фази - рухлива і нерухома - рідини, що не змішуються один з одним. Поділ речовин грунтується на відмінності в їх коефіцієнтах розподілу між цими фазами.
Вперше метод тонкошарової хроматографії заявив про себе як "Паперова тонкошарова хроматографія", яка грунтувалася на розподільному методі розділення компонентів.

Розподільна хроматографія на папері.


У зв'язку з тим, що використовувана в цьому методі хроматографічна папір (спеціальні сорти фільтрувального паперу) містять в порах воду (20-22%), в якості іншої фази використовуються органічні розчинники.
Використання хроматографії на папері має ряд істотних недоліків: залежність процесу поділу від складу і властивостей паперу, зміна вмісту води в порах паперу при зміні умов зберігання, дуже низька швидкість хроматографирования (до декількох діб), низька відтворюваність результатів. Ці недоліки серйозно впливають на поширення хроматографії на папері як хроматографічного методу.
Тому можна вважати закономірним поява хроматографії в тонкому шарі сорбенту - тонкошарової хроматографії.

Основи тонкошарової хроматографії.


У методі ТШХ хроматографування речовин відбувається в тонкому шарі сорбенту, нанесеного на тверду плоску підкладку. Поділ в цьому методі в основному відбувається на основі сорбції-десорбції.
Використання різних сорбентів, дозволило значно розширити та покращити цей метод.
На початку появи методу пластини доводилося виготовляти самостійно. Але на сьогоднішній день в основному використовуються пластини заводського виготовлення, які мають досить широкий асортимент як за розмірами і носіям, так і по подложкам.
Сучасна хроматографічна пластинка являє собою основу зі скла, алюмінію або полімеру (наприклад політерефталат). У зв'язку з тим, що скляна основа стає менш популярною (часто б'ється, не можна розділити пластинку на кілька частин не пошкодивши шар сорбенту, важка за вагою), найбільшого поширення набули пластини, в якості основ яких використовують алюмінієву фольгу або полімери.
Для закріплення сорбенту застосовують гіпс, крохмаль, силиказоль та ін., Які утримують зерна сорбенту на підкладці. Товщина шару може бути різна (100 і більше мкм), але найважливіший критерій - шар повинен бути рівномірний по товщині в будь-якому місці хроматографічної пластинки.

Сорбенти


Найбільш поширеним сорбентом є силікагель.
Силікагель - гідратований кремнієва кислота, що настає при дії мінеральних кислот на силікат натрію і сушкою утворився золю. Після розмелювання золю використовують фракцію певної зернистості (зазначену на платівці, зазвичай 5-20 мкм).
Силікагель є полярним сорбентом, у якого в якості активних центрів служить групи -ОН. Він легко сорбує на поверхні воду і утворює водневі зв'язки.
Окис алюмінію. Окис алюмінію є слабо основним адсорбентом і використовується в основному для розділення сполук слабоосновная і нейтрального характеру. Недоліком пластин на окису алюмінію є обов'язкова активація поверхні перед використанням в сушильній шафі при високій температурі (100-150 0 С) і низька, порівняно з силікагелем адсорбційна ємність шару.
Кизельгур - адсорбент, отриманий із природних мінералів: діатомових земель. Сорбент володіє гідрофільними властивостями, але більш низькою адсорбційною ємністю шару в порівнянні з силікагелем.
Кремнекислих магній менш полярний ніж силікагель і зазвичай використовується у випадках, коли більш полярні адсорбенти не дали ефективного поділу.
Целюлоза - тонкошарові пластини з нанесеною целюлозою дуже ефективні для розділення складних органічних молекул. Адсорбент являє собою в основному кульки целюлози діаметром до50 мкм, закріплені на носії крохмалем. Але як і в паперовій хроматографії, підйом фронту розчинника відбувається дуже повільно.
У іонообмінних хроматографічних пластинках як адсорбенту використовують іонообмінні смоли, що містять четвертинний амоній або активні сульфогрупи, що беруть участь в іонному обміні. Тонкошарова хроматографія з такого типу пластинками, проводиться з рухомими фазами містять сильні кислоти або лугу. Дані пластинки ефективні для поділу високомолекулярних і амфотерних сполук.

Вищеперелічені сорбенти є найбільш поширеними, але крім цих існують безліч речовин, що використовуються як сорбенти. Це тальк, сульфат кальцію, крохмаль і т.д ..
У той же час навіть вже зазначені сорбенти можуть бути модифіковані для додання їм нових сорбційних властивостей (просочення сорбентів реактивами, наприклад AgNO 3, створення пластин з оберненою фазою). Саме таке розмаїття можливих фаз при мінімальних витратах дозволяють використовувати ТШХ для хроматографування величезного числа речовин.

Розчинники


У тонкошарової хроматографії, в якості рухомої фази використовують або чисті речовини (етилацетат, бензол і т.п.), або суміші речовин (системи) у певному співвідношенні.
Підбір рухомої фази (системи) проводиться за такими правилами:

  • Вибирають таку систему, в якій компоненти, що розділяються мають невелику розчинність (якщо розчинність речовини висока, то речовини будуть переміщатися з фронтом, при низькій розчинності - залишатися на старті). При розподільної хроматографії або при використанні звернених фаз, розчинність речовин повинна бути вище в рухомій фазі, ніж в нерухомій.

  • Склад системи повинен бути постійним і легко відтворюваним.

  • Розчинник або компоненти системи не повинні бути отруйними або дефіцитними.

  • Система має повністю поділяти речовини близького будови, причому відмінності в Rf повинно бути не менше 0,05.

  • Система не повинна викликати хімічні зміни поділюваних компонентів.

  • У вибраній системі аналізовані речовини повинні мати різні значення Rf і розподілятися по всій довжині хроматограми. Бажано, щоб значення Rf лежало в межах 0,05-0,85.

  • При виборі системи також необхідно враховувати природу поділюваних речовин. Так, при хроматографування речовин, що мають основні властивості система не повинна володіти кислотними властивостями і навпаки.

Ці рекомендації дають попередню оцінку обраної системи. Останнє слово все одно залишається за експериментом.

Підготовка пластин


При використанні придбаних пластин, для хроматографування їх необхідно попередньо підготувати. Це пов'язано з тим, що адсорбенти пластин при зберіганні сорбують не тільки вологу, але й інші речовини, що містяться в повітрі. При використанні непідготовлених пластин в процесі хроматографування з'являється фронт "бруду", який може заважати визначенню речовин, що мають великі значення Rf, а деякі речовини, наприклад вода, може змінювати склад рухомої фази, змінюючи тим самим одержувані значення Rf.
Попередня підготовка пластин полягає в разгонке пластин чистим розчинником на всю висоту пластинки (метанол, бензол, діетиловий ефір), з подальшою сушкою пластини в сушильній шафі при температурі 110-120 0С протягом 0,5-1 години. Таким способом можна підготувати відразу кілька пластин і при зберіганні їх у сухому герметичному місці, зберігають свої властивості кілька місяців.

Техніка нанесення досліджуваних розчинів.


Як виявляється, нанесення досліджуваної речовини не така складна операція, але разом з тим, вона дуже впливає на одержувані результати хроматографування.
Часто, дослідженню підлягають або рідкі аналізовані речовини, або розчини твердих речовин, без будь-якої попередньої пробаподготовкі.
Тому необхідно завжди пам'ятати ряд моментів, серйозно впливають на результати поділу.
Найбільш важливим є концентрація наносяться речовин. У ТШХ прийнято наносити концентрації розчинів близько 1%. Але з іншого боку чутливість методу дозволяє визначати речовини з набагато меншими концентраціями.
Якщо в досліджуваному речовині невідома загальна концентрація компонентів, або відома концентрація але такого типу речовини ще не хроматографіровалі, потрібно визначити яку кількість досліджуваного розчину достатньо для якісного хромаграфірованія. Існують кілька прийомів, що дозволяють це визначити.
Для початку потрібно нанести кілька плям хроматографіруемого розчинів, рівні за розміром, але з різною кількістю (наприклад 1, 2, 5 мкл) і після хроматографування вивчити форму і розміри розділених плям.
Так при правильно підібраній концентрації форма розділених речовин така ж, як і форма нанесеною на лінії старту. Якщо розділення плями мають великі розміри, ніж пляма на старті, то нанесена концентрація занадто велика. Поява "хвостів", неправильна форма розділених плям на платівці теж може говорити про високу концентрацію, але може бути викликана неправильно підібраного хроматографічної системою, або хімічним взаємодією поділюваних компонентів.
Підбором кількості нанесеного речовини і системи розчинників можна домогтися повного поділу на одній платівці до десяти компонентів у досліджуваних речовинах. Зручно наносити зразки на спеціальному столику з трафаретами і підігрівом. Нанесення плям проводять на "лінії старту" 1-2 см від нижнього краю пластинки. Це необхідно для того, щоб при опусканні пластинки в систему не відбувалося розчинення в ній зразків, а все нанесене речовина піддалося хроматографування.
Нанесення розчинів проводять або мікрошпріцем, або відградуйовану капілярами. Розмір наносимого плями не повинен перевищувати 4 мм. Це пов'язано з тим, що при більшому розмірі плями, відбувається зміна форми під дією фізичних сил, та й кордони розділених компонентів можуть перекриватися.
Нанесення на пластини досліджуваних речовин не повинні супроводжуватися руйнуванням сорбенту (що досить сильно впливає на якість розділення), тому крапля повинна наноситися киснем голки або капіляра про шар сорбенту, а не натисканням. На розмір утворюється плями впливає не тільки кількості наносимого розчину, а й від полярності розчинника і його температури кипіння. Так при нанесенні одного і того ж речовини в різних розчинниках, що утворилося пляма в якому в якості розчинника використовувався метанол буде більше, ніж пляма від розчину хлороформу. з іншого боку при підігріві підкладки випаровування розчинників буде інтенсивніше і розмір плями також зменшується.
Звичайно, простіше використовувати при нанесенні для підсушування плям фен, але тільки в тому випадку, коли є повна впевненість, що наносяться речовини не будуть окислюватися під дією гарячого повітря.
Відстань між наносяться плямами має бути близько 2 см.
Іноді при хроматографування на пластинках спостерігається крайовий ефект, в результаті чого плями розташовуються не на одній лінії а мають вигляд підкови, або по діагоналі. Для усунення цього ефекту кожна пляма можна "забезпечити" своєї доріжкою, відокремивши нанесений зразок від інших шляхом видалення лінії сорбенту. Це найкраще робити під лінійку гострим предметом (типу скальпеля) але обережно, щоб не видалити занадто багато сорбенту.
Після нанесення досліджуваних речовин на платівку, необхідно домогтися повного видалення розчинників, так як навіть невеликий вміст розчинника в досліджуваній речовині може вплинути на поділ і навіть змінити склад хроматографічної системи.
Видалення розчинників зазвичай проводять природною сушкою пластин 5-10 хв, або при нагріванні феном або в сушильній шафі.

Хроматографування


Тонкошарова хроматографія має кілька способів, пов'язаних, в основному, з видом руху розчинників.

  • Висхідна тонкошарова хроматографія

  • Низхідна тонкошарова хроматографія

  • Горизонтальна тонкошарова хроматографія

  • Радіальна тонкошарова хроматографія.

Висхідна тонкошарова хроматографія


Цей вид хроматографії найбільш поширений і заснований на тому, що фронт хроматографічної системи піднімається по платівці під дією капілярних сил, тобто фронт хроматографічної системи рухається знизу-вгору. Для цього методу використовується найбільш просте устаткування, так як в якості хроматографічної камери можна використовувати будь-яку ємність з плоским дном і щільно закривається кришкою, в яку вільно поміщається хроматографічна пластинка.
Метод висхідній тонкошарової хроматографії має ряд своїх недоліків. Наприклад, швидкість підняття фронту по платівці відбувається нерівномірно, тобто в нижній частині вона найвища, а у міру підняття фронту зменшується. Це пов'язано з тим, що у верхній частині камери насиченість парами розчинника менше, тому розчинник з хроматографічної пластинки випаровується інтенсивніше, отже зменшується його концентрація і швидкість руху сповільнюється. Для усунення цього недоліку по стінках хроматографічної камери прикріплюють смужки фільтрувального паперу, за якими піднімається хроматографічна система насичує парами камеру по всьому об'єму.
Деякі хроматографічні камери мають на дні поділ на дві ванночки. Це удосконалення дозволяє не тільки зменшити витрату хроматографічної системи (для отримання необхідної висоти хроматогратографіческой системи потрібно менший обсяг) але й використовувати додаткову кювету для розчинника, що збільшує тиску насичених парів в камері.
Недоліком також можна вважати необхідність стежити за фронтом розчинника, так як можливо "втікання" лини фронту розчинника до верхнього краю. У такому випадку визначити дійсне значення Rf вже не представляється можливим.

Низхідна тонкошарова хроматографія


Цей метод хроматографії заснований на тому, що фронт хроматографічної системи опускається по платівці в основному під дією сил тяжіння, тобто фронт рухомої фази рухається зверху вниз.
Для цього методу у верхній частині хроматографічної камери кріпиться кювета з хроматографічної системою з якої за допомогою гнота на хроматографічну пластинку надходить розчинник, який стікає і відбувається хроматографування досліджуваного зразка.
До недоліків цього методу можна віднести ускладнення обладнання. Цей метод використовується в основному в паперовій хроматографії.

Горизонтальна тонкошарова хроматографія


Цей метод найбільш складний в аппаратурном оформленні але найбільш зручний. Так, в хроматографічної камері пластинка розміщується горизонтально і подача системи відбувається на один край пластинки за допомогою гнота. Фронт розчинника рухається в протилежний бік.
Є ще один прийом, що дозволяє гранично спростити камеру. Для цього хроматографическую пластинку на алюмінієвій основі злегка згинають і поміщають в камеру. В даному випадку система буде надходити з двох сторін одночасно. Для цієї мети підходять тільки пластини з алюмінієвою підкладкою, так як пластикова і скляна основа "несгібаема", тобто не зберігаються форму.
До переваг цього методу можна віднести те, що в горизонтальній кюветі насичення парами системи відбувається набагато швидше, швидкість руху фронту постійна. А при хроматографування з двох сторін, фронт не "тікає"

Радіальна тонкошарова хроматографія.


Радіальна тонкошарова хроматографія полягає в тому, що в центр пластинки наноситься досліджувана речовина і туди ж подається система, яка рухається від центру до краю пластинки.

Сушка пластин.


Після процесу поділу досліджуваних речовин, платівки сушать. Це теж важливий процес, оскільки при наявності на платівці навіть слідів розчинника, можливо отримати неправильні результати хроматографування.
Якщо хроматографічна система мала у своєму складі тільки легкокипящие компоненти, то достатньо природної сушки протягом 3-5 хвилин. Якщо ж до складу системи входять висококиплячі рідини (спирти, вода, органічні кислоти і т.д.), сушку пластин потрібно проводити не менше 10 хв або поміщати пластинку в сушильну шафу.

Ідентифікація розділених речовин.


Висушена платівка є хроматограммой досліджуваних речовин. Якщо речовини є пофарбованими, то ідентифікація починається з визначення кольору розділених речовин.
Але в більшості випадків розділяються речовини безбарвні і просте візуальне порівняння неможливо.
Для тонкошарової хроматографії існує кілька видів якісного аналізу (ідентифікації) розділених речовин:

  • Візуальні методи і визначення Rf розділених речовин.

  • Кольорові реакції.

  • Порівняння зі свідками.

  • Фізико-хімічні методи ідентифікації.

Розглянемо докладніше кожен вид якісного аналізу в тонкошарової хроматографії.

Фізичні методи


Візуальні методи використовуються в основному, для визначення місця розташування плям розділених речовин на хроматографічної платівці. Для цього пластинку розглядають як у видимому світлі, так і використовуючи ультрафіолетове світло (в основному світло з довжиною хвилі 366 і 254 нм)
Це перший етап ідентифікації, на якому визначається якість підібраних умов і отриманих результатів хроматографирования.
Так, визначивши якість хроматографирования (відсутність "хвостів" поділюваних речовин або перекриття їх плям, правильну форму і розміри, відсутність злиття хроматографічних доріжок і т.д.) та визнання придатним проведеного поділу для подальшого дослідження, визначають Rf виявлених плям.

Значення Rf.


Одним з основних показників в ТШХ є показник Rf. Цей параметр є аналогією часом утримування і залежить як від властивостей поділюваних речовин, складу рухомої фази і сорбенту, так і від фізичних параметрів.
Визначення значення Rf проводять як відношення відстані минулого речовиною до відстані, що пройшов фронтом розчинника

Rf = L / L 0

Значення Rf - величина безрозмірна і має значення від 0 до 1. Однак у літературі нерідко зустрічається такі показники як hRf, RfЧ100, які є тим же Rf, але помноженими на 100, для того, щоб не оперувати десятковими значеннями.
На значення Rf не впливає відстань пройдена фронтом розчинника, однак у багатьох методиках описується проходження фронту на відстань 10 см. Це використовується тільки для облечения розрахунків Rf.
На практиці, на початку визначають відстань минуле фронтом розчинника: від лінії старту (а не від краю пластинки) до місця, де знаходився фронт в момент закінчення хроматографування. Потім визначають відстань від лінії старту до плями розділеного речовини. Під тут і впливає розмір плями! Адже якщо пляма має круглу форму і невеликий розмір, то отримане Rf має чітке значення. А якщо отримане пляма має великий розмір або неправильну форму, то при визначенні Rf такого плями, помилка може досягти 0,1!
У разі розподільної хроматографії коефіцієнт розподілу речовини та її Rf пов'язано співвідношенням:



де Sп і -Площа поперечних перерізів рухомою і нерухомою фази.
Як ми бачимо, Коефіцієнт розподілу, при постійному відношенні Sп / Sн є величина пропорційно залежна від Rf, і може бути визначена через нього.

Кольорові реакції.



Кольорові реакції в тонкошарової хроматографії використовуються надзвичайно широко. Вони служать не тільки для визначення місця розташування розділених компонентів (обробка сірчаною кислотою, парами йоду), а й визначення як класу речовин, так і ідентифікації (за наявності індивідуальних реакцій).
Ми не будемо тут розглядати це величезна різноманітність кольорових якісних реакцій, скажемо лише, що при збігу всіх якісних реакцій і збігу отриманих значень Rf речовини в трьох різних системах з літературними даними, речовина ідентифікована. Хоча, на мій погляд, необхідно додаткове підтвердження дослідженням іншим фізико-хімічним методом.

Порівняння зі свідком.


При проведенні досліджень речовин з передбачуваним складом, застосовують метод хроматографирования зі свідком - відомим речовиною. Цей метод використовується коду важко витримати умови хроматографування, немає літературних даних Rf для даної системи або адсорбенту, використання градієнтного методу і т.д. Та й при проведенні кольорових реакцій можна порівняти не тільки кольору, але і відтінки досліджуваних речовин і свідків, що також важливо.
З іншого боку цей метод вимагає додаткових витрат на свідки.

Фізико-хімічні методи ідентифікації.


Принадність тонкошарової хроматографії полягає в тому, що після хроматографування кожне розділене речовину можна надалі досліджувати іншими методами набагато простіше. І справа тут не в тому, що інші методи хроматографування не можуть цього. Справа тут в складності виділення і матеріальних витратах на спеціальні пристосування, у яких тільки одне завдання - виділити речовину.
У тонкошарової хроматографії є ​​тільки одна трудність - зняти шар сорбенту і вимити з нього речовину. Надалі можна його досліджувати з використанням ІК і УФ-спектрометрії, рентгено-структурними методами, ЯМР і т.д.
Тому, використовуючи тонкошарову хроматографію для розділення сумішей, можна не тільки досліджувати кожен компонент різними методами, а й напрацювати невелика кількість, у тому числі і для свідків.

Методи кількісного аналізу


Кількісний аналіз в тонкошарової хроматографії має декілька видів, що характеризує кожен етап розвитку методу. І хоча деякі методи можна застосовувати тільки як напівкількісні, вони досі застосовуються на практиці.

Метод візуального порівняння. Як говорилося вище, інтенсивність забарвлення плями і його розмір від кількості хроматографіруемого речовини. Тому візуальне кількісне визначення побудовано на кількох прийомах.
Метод розведення. Цей метод полягає в тому, що для кожної речовини визначають граничну концентрацію, при якій речовина не може бути визначено хроматографічним методом. При хроматографування досліджуваної речовини поводять розбавлення до тих пір, поки воно перестає проявлятися на платівці.
Зміст речовини С, визначене таким методом знаходять за формулою:

C = an

де n -разбавленіе, а -Концентрація речовини, при якому воно не виявляється при хроматографування.
Метод визначення площі плями. Якщо наносити однакові обсяги досліджуваних речовин і свідків, то вийшли після хроматографування площі плям пропорційна логарифму концентрації речовини. S = a ln c + b

де а і b - емпіричні коефіцієнти, що визначаються експериментальним шляхом.
Якщо пляма розділеного речовини має різкі межі, то площа плями можна визначити ваговим методом (вирізати пляму і зважити), заміряється планіметром. Цей метод дає помилку до 10-15%.
Однак він має ряд істотних недоліків. Перший і найсуттєвіший в тому, що таким чином можна визначати концентрацію пофарбованих речовин або мають флуоресценцію в УФ області (254, 366 нм). Цей недолік можна усунути додаванням в сорбент різних люмінофорів, то при цьому збільшується похибка визначення.
Обробка пластин проявляють речовинами (реактивами) також може бути використана (наприклад використання фільтрувального паперу просоченої котрі виявляють реагентом з наступним контактом з хроматографічної платівкою і подальшим визначенням на ній площі проявленого речовини), але похибка визначення також висока.
Необхідність більш достовірного результату кількісного визначення привела до використання інструментальних методів.
Метод елюювання. Цей метод полягає в тому, що розділене речовина змивають з сорбенту розчинником і визначають його концентрацію вже іншими методами - фотометричними, полярографическая і т.д. Це досить точний метод, але тільки за умови кількісного виділення розділеного речовини. Через високу трудомісткості метод використовується досить рідко і неприйнятний при великій кількості досліджуваних зразків.
Фотографічний метод визначення полягає у фотографуванні пластинок з розділеним речовиною і подальшим визначенням ступеня почорніння, з використанням десінтометров.
Радиографический метод аналогічний фотометричному, тільки з тією різницею, що визначається почорніння пластинки, викликане випромінюванням розділеного речовини. Цей метод використовується тільки при визначенні речовин з міченими атомами.
Фотодесінтометріческій метод може бути використаний без виділення речовини з платівки і заснований на визначенні не тільки площі плями, але і його інтенсивності.
Це найбільш точний метод визначення концентрації речовин, оскільки дозволяє при використанні калібрувальних графіків, проводити досить точні кількісні визначення всіх розділених речовин (до 2-10%) безпосередньо на платівці за короткий проміжок часу.
Не дивно, що при розвитку тонкошарової хроматографії, застосування десінтометров збільшується, чутливість і, отже, точність визначення концентрації розділених речовин підвищується і наближається до точності високоефективної рідинної хроматографії.

Рис. 1. Типова камера для прояву хроматографічної пластинки з тонким шаром



  1. кришка

  2. скляна камера

  3. пластинка ТШХ

  4. сорбент

  5. місце нанесення проби

  6. розчинник


наступна сторінка >>